Социальные сети:

Диализ белков это


Диализ (биохимия) - Dialysis (biochemistry)

Эта статья об использовании диализа в лабораторных, исследовательских, производственных или образовательных учреждениях. Для получения информации об использовании диализа для лечения почечной или печеночной недостаточности см. Диализ или диализ печени . Для получения информации о диализе или использовании обратного осмоса при очистке воды см. Обратный осмос .

Процесс разделения молекул

В биохимии , диализ представляет собой процесс разделения молекул в растворе по разности их скоростей диффузии через полупроницаемую мембрану, такие , как диализный трубка .

Диализ - это распространенный лабораторный метод, который работает по тому же принципу, что и медицинский диализ . В контексте исследований в области наук о жизни наиболее распространенным применением диализа является удаление нежелательных малых молекул, таких как соли, восстановители или красители, из более крупных макромолекул, таких как белки , ДНК или полисахариды . Диализ также обычно используется для исследований обмена буфером и связывания лекарств.

Концепция диализа была введена в 1861 году шотландским химиком Томасом Грэмом. Он использовал эту технику для разделения растворенных веществ сахарозы (малая молекула) и гуммиарабика (большая молекула) в водном растворе. Он назвал диффундирующие растворенные вещества кристаллоидами и те, которые не проходят через мембрану коллоидами.

Исходя из этой концепции, диализ можно определить как процесс самопроизвольного отделения взвешенных коллоидных частиц от растворенных ионов или молекул малых размеров через полупроницаемую мембрану. Чаще всего диализные мембраны изготавливаются из целлюлозы, модифицированной целлюлозы или синтетического полимера (ацетата целлюлозы или нитроцеллюлозы).

Принципы диализа

Диффузия - это случайное тепловое движение молекул в растворе ( броуновское движение ), которое приводит к чистому движению молекул из области с более высокой концентрацией в область с более низкой концентрацией, пока не будет достигнуто равновесие. При диализе образец и буферный раствор (называемый диализатом) разделены полупроницаемой мембраной, которая вызывает различные модели диффузии, тем самым позволяя разделение молекул как в образце, так и в диализате.

Из-за размера пор мембраны большие молекулы в образце не могут проходить через мембрану, тем самым ограничивая их диффузию из камеры для образца. Напротив, небольшие молекулы будут свободно диффундировать через мембрану и достичь равновесия по всему объему раствора, тем самым изменяя общую концентрацию этих молекул в образце и диализате (см. Диализный рисунок справа). После достижения равновесия конечная концентрация молекул зависит от объемов используемых растворов, и если уравновешенный диализат заменяется (или заменяется) свежим диализатом (см. Процедуру ниже), диффузия еще больше снизит концентрацию малых молекул. в образце.

Диализ можно использовать для введения или удаления небольших молекул из образца, поскольку небольшие молекулы свободно перемещаются через мембрану в обоих направлениях. Это делает диализ полезным методом для множества применений. См. Раздел « Трубки для диализа» для получения дополнительной информации об истории, свойствах и производстве полупроницаемых мембран, используемых для диализа.

Диализ - это процесс, используемый для изменения матрицы молекул в образце путем дифференциации молекул по размеру. Например, диализ происходит, когда образец, содержащийся в целлюлозном мешке, погружается в раствор диализата. Во время диализа достигается равновесие между образцом и диализатом, поскольку только небольшие молекулы могут проходить через целлюлозную мембрану, оставляя после себя только более крупные частицы. Для удаления солей можно использовать диализ.

Осмос - еще один принцип, по которому диализ работает. Во время осмоса жидкость перемещается из областей с высокой концентрацией воды в области с более низкой концентрацией воды через полупроницаемую мембрану до достижения равновесия. При диализе избыточная жидкость перемещается от образца к диализату через мембрану до тех пор, пока уровень жидкости не станет одинаковым между образцом и диализатом.

Наконец, ультрафильтрация, которая представляет собой конвективный поток воды и растворенных веществ вниз по градиенту давления, вызванному гидростатическими или осмотическими силами. При диализе ультрафильтрация удаляет из пробы молекулы отходов и лишние жидкости.

Диализ - это процесс, используемый для изменения матрицы молекул в образце путем дифференциации молекул по размеру.

Типы

Диффузионный диализ

Диффузионный диализ - это процесс самопроизвольного разделения, в котором движущей силой, вызывающей разделение, является градиент концентрации. Он имеет увеличение энтропии и уменьшение свободной энергии Гиббса, что означает, что он термодинамически выгоден. В диффузионном диализе используются анионообменные мембраны (AEM) или катионообменные мембраны (CEM) в зависимости от соединений, которые необходимо разделить. AEM позволяет прохождение анионов, в то время как препятствует прохождению катионов из-за отторжения коионов и сохранения электронейтральности. С катионообменными мембранами происходит обратное.

Электродиализ

Электродиализ - это процесс разделения, в котором в качестве движущей силы используются ионообменные мембраны и электрический потенциал. В основном он используется для удаления ионов из водных растворов. Обычно используются три процесса электродиализа - диализ Доннана, обратный электродиализ и электродиализ. Эти процессы будут объяснены ниже.

Доннан Диализ

Доннановский диализ - это процесс разделения, который используется для обмена ионами между двумя водными растворами, которые разделены мембраной CEM или AEM. В случае наличия катионообменной мембраны и двух растворов с разной кислотностью протоны (H + ) проходят через мембрану в менее кислую сторону. Он индуцирует электрическую мощность, которая вызывает поток катионов, присутствующих на менее кислотной стороне, в более кислую сторону. Процесс завершится, когда изменение концентрации H + будет на тот же порядок величины, что и разница концентраций отделенного катиона.

Обратный электродиализ

Обратный электродиализ - это технология, основанная на мембране, которая получает электричество от смешивания двух водных потоков разной солености. Обычно используются анионообменные мембраны (AEM) и катионообменные мембраны (CEM). AEM используются для обеспечения прохождения анионов и препятствования прохождению катионов, а CEM используются для обратного. Катионы и анионы в воде с высокой соленостью перемещаются в воду с низкой соленостью, катионы проходят через CEM, а анионы через AEM. Это явление можно преобразовать в электричество.

Электро-электродиализ

Электро-электродиализ - это электромембранный процесс с использованием трех отсеков, который сочетает электродиализ и электролиз. Он обычно используется для извлечения кислоты из раствора с использованием AEM, CEM и электролиза. Три отсека разделены двумя барьерами - ионообменными мембранами. В отсеке посередине находится очищаемая вода. Расположенные по бокам отсеки содержат чистую воду. Анионы проходят через AEM, а катионы проходят через CEM. Электричество позволяет создавать H + на стороне анионов, чтобы реагировать с ними, и OH - на стороне катионов, чтобы также реагировать с ними.

Процедура диализа

Оборудование

Разделение молекул в растворе с помощью диализа - относительно простой процесс. Помимо буфера для образца и диализата, все, что обычно требуется, это:

  • Диализная мембрана в подходящем формате (например, трубка, кассета и т. Д.) И с отсечкой по молекулярной массе (MWCO)
  • Контейнер для буфера диализата
  • Возможность перемешивать растворы и контролировать температуру

Общий протокол

Типичная процедура диализа образцов белка выглядит следующим образом:

  1. Подготовьте мембрану согласно инструкции.
  2. Загрузите образец в диализную трубку, кассету или устройство.
  3. Поместите образец во внешнюю камеру диализного буфера (осторожно перемешивая буфер).
  4. Диализ в течение 2 часов (при комнатной температуре или 4 ° C)
  5. Замените диализный буфер и проведите диализ еще 2 часа.
  6. Замените диализный буфер и проведите диализ в течение 2 часов или на ночь.

Общий объем образца и диализата определяют конечную равновесную концентрацию малых молекул по обе стороны мембраны. Используя соответствующий объем диализата и многократные замены буфера, можно снизить концентрацию мелких загрязняющих веществ в образце до приемлемого или незначительного уровня. Например, при диализе 1 мл образца против 200 мл диализата концентрация нежелательных диализируемых веществ будет уменьшена в 200 раз при достижении равновесия. После двух дополнительных замен буфера по 200 мл каждая, уровень загрязнения в образце будет снижен в 8 x 10 6 (200 x 200 x 200) раз.

Оптимизация переменных и протокола

Хотя диализ образца относительно прост, универсальная процедура диализа для всех приложений не может быть предоставлена ​​из-за следующих переменных:

  • Объем образца
  • Размер разделяемых молекул
  • Используемая мембрана
  • Геометрия мембраны, влияющая на расстояние диффузии

Кроме того, конечная точка диализа в некоторой степени субъективна и зависит от приложения. Следовательно, общая процедура может потребовать оптимизации.

Мембраны для диализа и MWCO

Диализные мембраны производятся и характеризуются в соответствии с предельными значениями молекулярной массы (MWCO). В то время как мембраны с MWCO в диапазоне от 1 до 1000000 кДа коммерчески доступны, наиболее часто используются мембраны с MWCO около 10 кДа. MWCO мембраны является результатом количества и среднего размера пор, созданных во время изготовления диализной мембраны. MWCO обычно относится к наименьшей средней молекулярной массе стандартной молекулы, которая не будет эффективно диффундировать через мембрану во время расширенного диализа. Таким образом, диализная мембрана с MWCO 10 кД обычно удерживает более 90% белка с молекулярной массой не менее 10 кДа.

Важно отметить, что MWCO мембраны не является четко определенной величиной. Молекулы с массой, близкой к пределу MWCO мембраны, будут диффундировать через мембрану медленнее, чем молекулы, значительно меньшие, чем MWCO. Чтобы молекула могла быстро диффундировать через мембрану, она, как правило, должна быть по крайней мере в 20-50 раз меньше, чем рейтинг MWCO мембраны. Следовательно, нецелесообразно отделять белок 30 кДа от белка 10 кДа с помощью диализа через диализную мембрану, рассчитанную на 20 кДа.

Диализные мембраны для лабораторного использования обычно изготавливаются из пленки регенерированной целлюлозы или сложных эфиров целлюлозы. См. Ссылку для обзора целлюлозных мембран и производства.

Форматы лабораторного диализа

Диализ обычно проводят в закрытых пакетах диализных трубок или в различных форматированных диализаторах. Выбор используемой схемы диализа во многом зависит от размера образца и предпочтений пользователя. Трубки для диализа - самый старый и, как правило, наименее дорогой формат, используемый для диализа в лаборатории. Трубку разрезают и закрывают зажимом на одном конце, затем заполняют и запечатывают зажимом на другом конце. Трубки обеспечивают гибкость, но вызывают повышенное беспокойство относительно обращения, герметизации и извлечения проб. Трубки для диализа обычно поставляются влажными или сухими в рулонах или складчатых телескопических трубках.

Широкий выбор диализных устройств (или диализаторов) доступен от нескольких поставщиков. Диализаторы предназначены для определенных диапазонов объемов пробы и обеспечивают большую безопасность пробы, а также повышенную простоту использования и производительности для диализных экспериментов с использованием трубок. Наиболее распространенными предварительно отформатированными диализаторами являются линейки продуктов Slide-A-Lyzer, Float-A-Lyzer и Pur-A-lyzer / D-Tube / GeBAflex Dialyzers.

Поставщики

Приложения

Диализ имеет широкий спектр применения. Их можно разделить на две категории в зависимости от типа используемого диализа.

Диффузионный диализ

Некоторые применения диффузионного диализа объясняются ниже.

  • Сильные водные растворы каустической соды можно очистить от гемицеллюлозы с помощью диффузионного диализа. Это характерно для устаревшего процесса производства вискозы . Первым шагом в этом процессе является обработка почти чистой целлюлозы ( хлопковый линт или растворяющаяся целлюлоза ) крепкими (17-20% масс.) Растворами гидроксида натрия (каустической соды) в воде. Одним из эффектов этой стадии является растворение гемицеллюлоз ( полимеров с низкой молекулярной массой). В некоторых случаях желательно удалить как можно больше гемицеллюлозы из процесса, и это можно сделать с помощью диализа.
  • Кислоты можно извлечь из водных растворов с помощью анионообменных мембран. Этот процесс представляет собой альтернативную очистку промышленных сточных вод. Он используется для извлечения смешанной кислоты (HF + HNO 3 ), извлечения и концентрации Zn 2+ и Cu 2+ в H 2 SO 4 + CuSO 4 и H 2 SO 4 + ZnSO 4, а также для извлечения H 2. SO 4 из отработанных растворов серной кислоты, содержащих ионы Fe и Ni, которые образуются в процессе производства алмазов.
  • Щелочные отходы могут быть рекуперированы с помощью диффузионного диализа из-за их низкой стоимости энергии. Основание NaOH может быть извлечено из раствора для травления алюминия с применением технологии, разработанной Astom Corporation of Japan.
  • Деалкоголизация пива - еще одно применение диффузионного диализа. Принимая во внимание, что для этого метода применяется градиент концентрации, спирт и другие низкомолекулярные соединения переносятся через мембрану от более высоких концентраций к более низким, то есть к воде. Он используется для этого применения в тяжелых условиях эксплуатации и с возможностью удаления спирта до 0,5%.

Электродиализ

Некоторые применения электродиализа объясняются ниже.

  • Опреснение сыворотки - самая большая область применения этого типа диализа в пищевой промышленности. Для производства различных продуктов, таких как пирожные, хлеб, мороженое и детское питание, необходимо удалить сырую сыворотку, содержащую кальций, фосфор и другие неорганические соли. Предел деминерализации сыворотки составляет почти 90%.
  • Удаление кислотности фруктового сока, такого как виноградный, апельсиновый, яблочный и лимонный, - это процессы, в которых применяется электродиализ. В этом методе используется анионообменная мембрана, что означает, что ионы цитрата из сока экстрагируются и заменяются ионами гидроксида.
  • Обессоливание соевого соуса. Обычные значения соли в сваренном соевом соусе составляют около 16-18%, что является довольно высоким содержанием. Электродиализ используется для уменьшения количества соли в соевом соусе. В настоящее время в обществе широко распространены диеты с низким содержанием соли.
  • Разделение аминокислот на кислотные, основные и нейтральные группы. В частности, цитоплазматические белки листьев экстрагируются из листьев люцерны с помощью электродиализа. Когда белки денатурируют, растворы могут быть обессолены (от ионов K + ) и подкислены ионами H + .

Преимущества и недостатки

У диализа есть не только преимущества, но и недостатки. Следуя структуре предыдущего раздела, обсуждаются плюсы и минусы в зависимости от типа используемого диализа. Преимущества и недостатки как диффузионного диализа, так и электродиализа описаны ниже.

Диффузионный диализ

Основным преимуществом диффузионного диализа является низкое энергопотребление аппарата. Эта мембранная технология работает при нормальном давлении и не имеет изменения состояния, следовательно, требуемая энергия значительно снижается. В то же время это снижает и эксплуатационные расходы. Кроме того, необходимо отметить низкую стоимость монтажа, простоту эксплуатации, а также стабильность и надежность процесса. Еще один ключевой аспект, поскольку изменение климата в наши дни становится все более и более важным, заключается в том, что диффузионный диализ не загрязняет окружающую среду.

В отличие от этого диффузионный диализатор имеет низкую производительность. Кроме того, еще один момент, который следует учитывать, - это низкая эффективность обработки. Существуют и другие методы, такие как электродиализ и обратный осмос, которые позволяют достичь большей эффективности, чем диффузионный диализ.

Электродиализ

Основное преимущество электродиализа - высокая степень восстановления, особенно при восстановлении воды. Другим преимуществом является то, что применяется не высокое давление, что означает, что эффект загрязнения не является значительным, и, следовательно, для борьбы с ними не требуются химические вещества. Кроме того, слой загрязнения не является компактным, что приводит к более высокому извлечению и увеличению срока службы мембраны. Также важно, чтобы обработка проводилась для концентраций выше 70 000 ppm, что устраняет предел концентрации. Наконец, энергия, необходимая для работы, мала из-за отсутствия фазового перехода. Фактически, он ниже по сравнению с необходимостью в процессах многоэтапной дистилляции (MED) и механического сжатия пара (MVC).

Основным недостатком электродиализа является ограничение плотности тока, процесс должен проводиться при более низкой плотности тока, чем максимально допустимая. Дело в том, что при приложении определенного напряжения диффузия ионов через мембрану не является линейной, что приводит к диссоциации воды, что снижает эффективность работы. Другой аспект, который следует принять во внимание, заключается в том, что, хотя для работы требуется низкая энергия, чем выше концентрация соли в исходном сырье, тем выше будет необходимая энергия. Наконец, в случае некоторых продуктов необходимо учитывать, что электродиализ не удаляет микроорганизмы и органические загрязнители, поэтому необходима дополнительная обработка.

Рекомендации

Смотрите также

Принцип метода диализа, его практическое значение. — Студопедия.Нет

Молекулярная масса, размеры и формы молекул белков. Общая характеристика физико-химических свойств белков. Растворимость и осаждаемость белков. Факторы стабилизации белковые молекулы в растворах.

Белки - высокомолекулярные соединения, но могут сильно отличаться по молекулярной массе, которая колеблется от 6000 до 1 000 000 Д и выше. Молекулярная масса белка зависит от количества аминокислотных остатков в полипептидной цепи, а для олигомерных белков - и от количества входящих в него протомеров (или субъединиц).

По форме молекул белки делят на глобулярные и фибриллярные. Глобулярные белки имеют более компактную структуру, их гидрофобные радикалы в большинстве своём спрятаны в гидрофобное ядро, и они значительно лучше растворимы в жидкостях организма, чем фибриллярные белки (исключение составляют мембранные белки).

1) большая молекулярная масса, которая колеблется в диапазоне от 6000 до нескольких миллионов дальтон.

2) растворимость, хорошо растворимы в воде. Причем растворы белков в воде весьма устойчивы. Первой причиной растворимости белков является наличие на поверхности молекул белков заряда, благодаря чему белковые молекулы практически не образуют нерастворимые в воде агрегаты. Второй причиной устойчивости белковых растворов является наличие у белковой молекулы гидратной (водной) оболочки. Гидратная оболочка отделяет белки друг от друга.

3) высаливание, то есть способность выпадать в осадок под действием водоотнимающих средств. Высаливание – процесс обратимый. Эта способность то переходить в раствор, то выходить из него очень важна для проявления многих жизненных свойств.

4) амфотерность, то есть наличие, как кислотных, так и основных свойств. Амфотерность связана с наличием в составе некоторых аминокислот свободных карбоксильных групп и аминогрупп. Это приводит к тому, что в кислой среде белки проявляют щелочные свойства, а в щелочной среде – кислотные. Однако при определенных условиях белки проявляют нейтральные свойства. Значение рН, при котором белки проявляют нейтральные свойства, называется изоэлектрической точкой. Изоэлектрическая точка для каждого белка индивидуальна. Белки по этому показателю делят на два больших класса – кислые и щелочные, так как изоэлектрическая точка может быть сдвинута либо в одну, либо в другую сторону.

5) способность к денатурации, Денатурация - это потеря белком нативности. Она заключается в постоянном или временном нарушении вторичной и третичной структуры белка, но при этом первичная структура сохраняется. Помимо температуры (выше 50 градусов) денатурацию могут вызвать другие физические факторы: излучении, ультразвук, вибрация, сильные кислоты и щелочи. Денатурация может быть обратимой и необратимой.

Полярные группы белков способны взаимодействовать с водой, а также с низкомолекулярными органическими соеди­нениями и ионами. Количество воды, связанной с белком, достигает 30-50 г на 100 г белка. Гидрофильных полярных групп значительно больше на поверхно­сти белковой глобулы, чем внутри ее, эти группы образуют так называе­мую гидратную оболочку белковой молекулы. Но есть и гидрофобные белки, они нерастворимы в воде, но растворяются в жирах (липидах) и встречаются в основном в клеточных мембранах. Растворимость белков зависит от количества гидрофильных (полярных) групп, от размеров и формы молекул, от величины суммарного заряда, а также от наличия в растворе других растворенных веществ. Например, некоторые белки не растворяются в дистиллированной воде, но растворяются в присутствии небольшой концентрации нейтральных солей. Растворимость белков зависит также от особенностей их струк­турной организации: глобулярные белки, как правило, лучше раствори­мы, чем фибриллярные. рН среды влияет на заряд белка, а, следовательно, на его рас­творимость. Между температурой и растворимостью белка строгой зависимо­сти не имеется.

Так как растворимость белков зависит от заряда и наличия гидратной оболочки, то исчезновение одного или обоих этих факторов ведет к осаждению белка.

Денатурация – необратимое осаждение белка из-за разрыва связей, стабилизирующих четвертичную, третичную, вторичную структуры белка, сопровождаемое изменением растворимости, вязкости, химической активности, снижением или полной потерей биологической функции.

Обратимость осаждения белков обусловлена сохранением первичной структуры белка. Восстановление физико-химических и биологических свойств белка называется ренатурация. Иногда достаточно просто удалить денатурирующий объект.

Высаливание – это добавление растворов нейтральных солей (Na2SO4, (Nh5)2SO4). Анионы (SO42–) и катионы (Na+, Nh5+) взаимодействуют с зарядами белка (группы Nh5+ и COO–). В результате заряд исчезает, и соответственно, исчезает взаимоотталкивание молекул. Одновременно резко уменьшается гидратная оболочка. Это ведет к "слипанию" молекул и осаждению.

При добавлении водоотнимающих средств (ацетон, этанол) происходит отнятие у белка гидратной оболочки, но не заряда. Растворимость несколько снижается, но денатурации не наступает. Например, антисептическое действие этанола.

Мягкое изменение рН до изоэлектрической точки белка ведет к исчезновению заряда, уменьшению гидратной оболочки и снижению растворимости молекулы.

Факторы стабилизации белка в растворе.

ГИДРАТНАЯ ОБОЛОЧКА- это слой молекул воды, определенным образом ориентированных на поверхности белковой молекулы. Поверхность большинства белковых молекул заряжена отрицательно, и диполи молекул воды притягиваются к ней своими положительно заряженными полюсами. Вода гидратной оболочки обладает особыми свойствами: она не является свободной, а связана с белковой молекулой. Это - “связанная” вода. Она принадлежит белку, и поэтому имеет особые свойства.

а) Температура кипения выше 1000С.

б) Температура замерзания ниже 0ОС.

в) В воде гидратной оболочки не растворяются различные соли и другие гидрофильные вещества.

г) Окружая каждую молекулу белка, гидратная оболочка не дает этим белковым молекулам сблизиться, соединиться и выпасть в осадок.

ЗАРЯД БЕЛКОВОЙ МОЛЕКУЛЫ-Поверхность большинства белковых молекул заряжена потому, что в каждой молекуле белка есть свободные заряженные СОО-и Nh4+группы. Изоэлектрическая точка (ИЭТ) большинства белков организма находится в слабокислой среде. Это означает, что у таких белков количество кислотных (СООН) групп больше количества основных групп (Nh4). рН плазмы крови около 7,36 - это выше ИЭТ большинства белков, поэтому в плазме крови белки имеют отрицательный заряд.

Принцип метода диализа, его практическое значение.

Для отделения низкомолекулярных примесей или замены состава среды используют диализ. Метод основан на том, что молекулы белка из-за своих размеров не могут проходить через полупроницаемые мембраны, в то время как низкомолекулярные вещества равномерно распределяются между объёмом, ограниченным мембраной, и окружающим раствором. После многократной замены внешнего раствора состав среды в диализном мешочке (концентрация солей, величина pH и др.) будет тот же, что и в окружающем растворе.

Диализ – очистка коллоидных растворов, в том числе и искусственное очищение крови и других жидкостей человеческого организма от скопившихся шлаков. Без диализа все пациенты с неработающими почками умерли бы от скопления токсинов в организме.

Электрические свойства белков. Механизм возникновения электрического заряда белков. Изоэлектрическая точка. Электрофоретическое разделение белков сыворотки крови на бумаге, протеинограмма здорового человека.

Электрические свойства белков определяются присутствием на их поверхности положительно и отрицательно заряженных аминокислотных остатков. Наличие заряженных группировок белка определяет суммарный заряд белковой молекулы. Если в белках преобладают отрицательно заряженные аминокислоты, то его молекула в нейтральном растворе будет иметь отрицательный заряд, если преобладают положительно заряженные – молекула будет иметь положительный заряд. Суммарный заряд белковой молекулы зависит и от кислотности (рН) среды

Изоэлектрическая точка (pI) — кислотность среды (pH), при которой определённая молекула или поверхность не несёт электрического заряда.

Диализ белков — инновационные устройства Thermo Fisher Scientific

Диализ — отделение низкомолекулярных примесей или изменение солевого состава среды за счёт низкомолекулярного растворителя и полунепроницаемой мембраны. Метод основан на том, что молекулы белка из-за своих размеров не могут проходить через полупроницаемые мембраны, в то время как низкомолекулярные вещества равномерно распределяются между объемом, ограниченным мембраной, и окружающим раствором. После многократной замены внешнего раствора состав среды в диализном мешочке (концентрация солей, величина pH и др.) будет тот же, что и в окружающем растворе. Диализ используется для широкого спектра применений: обессоливание, буферный обмен, удаление меченых реагентов, исследования связывания лекарств, рост и кормление клеток, очистка вирусов и обработка крови.
Продукция Thermo Fisher Scientific (Pierce) для диализа даёт возможность диализовать образцы в широком диапазоне объёмов от 10 мкл до 250 мл. Специальные диализные ёмкости не требуют применения клипс и других дополнительных приспособлений, что позволяет сэкономить время и избегать потерь или загрязнений образца.

Продукты серии Slide-A-Lyzer снабжены MWCO-мембраной (molecular weight cut-off, отсечка по молекулярной массе), предназначенной для диализа молекул с молекулярным весом до 2; 3,5; 7; 10 или 20 кДа. Характеристика разделения, определяемая диапазоном размеров пор диализной мембраны, чаще всего называется молекулярной массой (MWCO) мембраны. Традиционно MWCO мембраны относятся к наименьшей средней молекулярной массе стандартной молекулы, которая не будет эффективно диффундировать через мембрану. Как правило, самая маленькая глобулярная макромолекула (в дальтонах), которая удерживается более чем на 90% при расширенном диализе (в течение ночи), определяет номинальный MWCO. Таким образом, диализная мембрана с 10K MWCO обычно будет содержать белки, имеющие молекулярную массу по меньшей мере 10 кДа.

Ёмкости для диализа используют при работе с небольшим количеством образца, в диапазоне от 10 мкл до 2 мл. Кассеты для диализа необходимы, когда количество образца составляет от 0,5 мл до 30 мл. При больших объёмах, от 150 мл до 250 мл, используют колбы для диализа. Планшеты для диализа предназначены для обработки от 1 до 96 образцов объёмом от 10 до 100 мкл. Для образцов в диапазоне от 2 мл до 9,6 мл используют мешки для диализа.

Диализ (биохимия) • ru.knowledgr.com

В биохимии диализ - процесс отделения молекул в решении различием в их ставках распространения через полуводопроницаемую мембрану, таких как шланг трубки диализа.

Диализ - общая лабораторная техника, которая воздействует на тот же самый принцип как медицинский диализ. В контексте исследования науки о жизни наиболее распространенное применение диализа для удаления нежелательных маленьких молекул, таких как соли, уменьшая вещества, или окрашивает от больших макромолекул, таких как белки, ДНК или полисахариды. Диализ также обычно используется для буферного обмена и исследований закрепления препарата.

Принципы диализа

Распространение - случайное, тепловое движение молекул в решении (Броуновское движение), которое приводит к чистому движению молекул из области более высокой концентрации к более низкой концентрации, пока равновесие не достигнуто. В диализе образец и буферное решение (названный dialysate) отделены полуводопроницаемой мембраной, которая вызывает отличительные образцы распространения, таким образом разрешая разделение молекул и в образце и в dialysate.

Из-за размера поры мембраны, большие молекулы в образце не могут пройти через мембрану, таким образом ограничив их распространение в типовой палате. В отличие от этого, маленькие молекулы свободно распространятся через мембрану и получат равновесие через весь объем решения, таким образом изменяя полную концентрацию этих молекул в образце и dialysate (см., что диализ фигурирует в праве). Как только равновесие достигнуто, заключительная концентрация молекул зависит от объемов решений, включенных, и если уравновешенный dialysate будет заменен (или обменен) с новым dialysate (см. процедуру ниже), то распространение далее уменьшит концентрацию маленьких молекул в образце.

Диализ может использоваться, чтобы или ввести или удалить маленькие молекулы из образца, потому что маленькие молекулы перемещаются свободно через мембрану в обоих направлениях. Это делает диализ полезной техникой для множества заявлений. Посмотрите шланг трубки диализа для получения дополнительной информации об истории, свойствах и производстве полуводопроницаемых мембран, используемых для диализа.

Процедура диализа

Оборудование

Отделение молекул в решении диализом является прямым процессом. Кроме образца и буфера dialysate, все, что, как правило, необходимо:

  • Мембрана диализа в соответствующем формате (например, шланг трубки, кассета, и т.д.) и сокращение молекулярной массы (MWCO)
  • Контейнер, чтобы держать dialysate буферизует
  • Способность вызвать решения и управлять температурным (дополнительным)

Общий протокол

Типичная процедура диализа образцов белка следующие:

  1. Подготовьте мембрану согласно инструкциям
  2. Загрузите образец в шланг трубки диализа, кассету или устройство
  3. Образец места во внешнюю палату буфера диализа (с нежным побуждением буфера)
  4. Dialyze в течение 2 часов (при комнатной температуре или 4 °C)
  5. Измените буфер диализа и dialyze в течение еще 2 часов
  6. Измените буфер диализа и dialyze в течение 2 часов или ночного

Видео показывая протокол диализа, используя устройство диализа

Суммарный объем образца и dialysate определяет заключительную концентрацию равновесия маленьких молекул с обеих сторон мембраны. При помощи соответствующего объема dialysate и многократных обменов буфером, концентрация маленьких загрязнителей в пределах образца может быть уменьшена к приемлемым или незначительным уровням.

Например, когда dialyzing 1 мл образца против 200 мл dialysate, концентрация нежелательных dialyzable веществ будет уменьшена 200-кратная, когда равновесие будет достигнуто. Следующие два дополнительных буферных изменения 200 мл каждый, уровень загрязнителя в образце будет уменьшен фактором 8 x 10 (200 x 200 x 200).

Переменные и оптимизация протокола

Хотя dialyzing, образец относительно прост, универсальная процедура диализа всех заявлений, не может быть обеспечен из-за следующих переменных:

  • Типовой объем
  • Размер молекул, отделяемых
  • Мембрана использовала
  • Геометрия мембраны, которая затрагивает расстояние распространения

Кроме того, конечная точка диализа несколько субъективна и определенное применение. Поэтому, общая процедура могла бы потребовать оптимизации.

Мембраны диализа и MWCO

Мембраны диализа произведены и характеризованы согласно сокращению молекулярной массы (MWCO) пределы. В то время как мембраны с MWCOs в пределах от 1-1 000 000 килодальтонов коммерчески доступны, мембраны с MWCOs около 10 килодальтонов обычно используются. MWCO мембраны - результат числа и средний размер пор, созданных во время производства мембраны диализа. MWCO, как правило, относится к самой маленькой средней молекулярной массе стандартной молекулы, которая эффективно не распространится через мембрану во время расширенного диализа. Таким образом мембрана диализа с 10K MWCO будет обычно сохранять больше, чем 90% белка, имеющего молекулярную массу по крайней мере 10 килодальтонов.

Важно отметить, что MWCO мембраны не резко определенная стоимость. Молекулы с массой около предела MWCO мембраны будут распространяться через мембрану более медленно, чем молекулы, значительно меньшие, чем MWCO. Для молекулы, чтобы быстро распространиться через мембрану, это, как правило, должны быть по крайней мере 20-к на 50 времен меньшему, чем рейтинг MWCO мембраны. Поэтому, это не практично, чтобы отделиться, белок на 30 килодальтонов от белка на 10 килодальтонов, используя диализ через 20K оценил мембрану диализа.

Мембраны диализа для лабораторного использования, как правило, делаются из фильма восстановленной целлюлозы или сложных эфиров целлюлозы. Посмотрите ссылку для обзора мембран целлюлозы и производства.

Лабораторные форматы диализа

Диализ обычно выполняется в подрезанных мешках шланга трубки диализа или во множестве отформатированного dialyzers. Выбор диализа настроил используемый, в основном зависит от размера образца и предпочтения пользователя.

Шланг трубки диализа является самым старым и обычно наименее дорогой формат, используемый для диализа в лаборатории. Шланг трубки сокращен и запечатан со скрепкой в одном конце, затем заполнил и запечатал со скрепкой на другом конце. Шланг трубки обеспечивает гибкость, но увеличил проблемы относительно обработки, запечатав и типового восстановления. Шланг трубки диализа, как правило, поставляется или влажный или сухой в рулонах или плиссировал сложенные трубы.

Большое разнообразие устройств диализа (или dialyzers) доступно от нескольких продавцов. Dialyzers разработаны для определенных типовых диапазонов объема и обеспечивают большую типовую безопасность и улучшенную непринужденность использования и работы для экспериментов диализа по шлангу трубки. Наиболее распространенные предварительно отформатированные dialyzers - Понижение-Lyzer, Плавание-Lyzer и производственные линии Pur-A-lyzer/D-Tube/GeBAflex Dialyzers.

Поставщики

  • Термо научный
  • Лаборатории спектра
  • Рыбак научный
  • Аппарат Гарварда
  • Membrane Filtration Products, Inc.
  • http://www.HTDialysis.com

См. также

  • Брюшинный диализ
  • Автоанализатор

Методы диализа, кристаллизации, ультрафильтрации применяются для очистки белков от низкомолекулярных соединений (соли, сахара, аминокислоты)

Додецилсульфат натрия (ДДС-Na) Цетилтриметиламмонийбромид (ЦТАБ)

Гомогенизацию объектов рассматривают как начальную стадию выделения белков, но способ ее определяется конкретной задачей. Например, выделение ферментов из растительных материалов затруднено из-за экстрагирования большого количества фенолов, которые взаимодействуя с карбонильными группами пептидных групп при помощи водородных связей, вызывают денатурацию белка и потерю ферментами активности. Добавление в экстракт поливинилпирролидона, которые образуют с фенолами нерастворимые комплексы, предотвращает инактивацию ферментов.

Для изучения свойств белков обязательным условием является получение их в индивидуальном и, по возможности, не денатурированном состоянии.

Методы выделения, очистки и фракционирования белков

Липопротеиды высокой плотности (ЛПВП),

Липопротеиды низкой плотности (ЛПНП)

Хиломикроны,

Фосфопротеиды присутствуют и в костной и нервной тканях.

Липопротеиды. Сложные белки, простетическая группа которых образована липидами. Они представляют собой небольшого размера (150-200 нм) сферические частицы, наружная оболочка которых образована белками, придающими им гидрофильные свойства и способность передвигаться по крови, внутренняя часть – липидами и их производными.


Основная функция липопротеидов – транспорт по крови липидов. Липопротеиды подразделяются на:

Хиломикроны- наиболее крупные из липопротеидов, содержат до 98-99% липидов и 1-2% белка. Образуются в слизистой оболочке кишечника обеспечивают транспорт липидов в лимфу и кровь.

В ЛПНП количество белка составляет 9-20% , в них преобладают холестерин и триацилглицерины (до 40%). Холестерин транспортируется по крови больше в составе этой фракции.

В ЛПВП белковая часть составляет 35-50%, небелковая – фосфолипиды, холестерин.

Белки обычно теряют природные (нативные) свойства (растворимость, гидратация, ферментативная активность и т.д.), подвергаясь денатурации под влиянием различных факторов. Типичным примером необратимой денатурации белков является выпадение их в осадок под действием трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Длительный контакт со спиртом также приводит к необратимой денатурации белка. Денатурирующее действие различных факторов на белки можно смягчить проведением операций при температуре не выше +4 °С.


Методы выделения и очистки белков. Схема выделения белков сводится к измельчению биологического материала (гомогенизация), экстрагированию и собственно выделению, то есть очистке и получению белка в индивидуальном состоянии.

Разрушение клеточной структуры проводят измельчением материала в гомогенизаторах, мельницах, попеременным замораживанием и оттаиванием, применением ультразвуковых высокочастотных колебаний, пресс-методов с использованием высоких давлений и метода "азотной бомбы". В последнем случае клетки насыщаются азотом под давлением, которое затем сбрасывается, и клетки разрушаются.

На эффективность гомогенизации влияет не только способ разрушения клеточных структур, но и вид исследуемого материала. Так, животные клетки разрушаются относительно быстро, особенно в отсутствие сосудистой и соединительной ткани, тогда как растительные и микробные из-за присутствия клеточных стенок – трудно. В таком случае применяют методы растирания материала с песком, абразивным порошком или обрабатывают его лизоцимом или ферментными препаратами, содержащими ферменты целлюлазу, хитиназу и липазу. Гомогенизацию рекомендуется проводить в холодных комнатах или с использованием льда.

Экстракция белков может быть совмещена с гомогенизацией клеток и тканей, либо проведена отдельно, если продукт заранее измельчен. Для определения ферментативной активности белка достаточно, например, одноразовой экстракции, тогда как для количественного определения белковых фракций зерна – трех- или пятикратной. Условия экстрагирования белков (время, гидромодуль, температура и т.д.) подбираются эмпирически, основываясь на методиках ведущих научных школ или индивидуальном опыте.

Большинство белков животных тканей хорошо растворяются в 5 – 10 % растворах солей, тогда как для белков зерновых культур применяют буферные системы со значениями рН от кислых до слабощелочных (фосфатные, боратные, цитратные, трис-HCl), органические растворители и детергенты, разрывающие белок-липидные или белок-белковые связи:

СН3

СН3 – (СН2)7 – (С6Н4) – О – СН2 – СНОН)10Н ï

Тритон Х-100 С16Н35 – N+ – CH3

ï

СН3 – (СН2)10 – СН2 – О – SО3Na CH3

Растворители подбираются с учетом разрыва в белках определенных типов связей. Так, уксусная кислота ослабляет ионные связи, сообщая молекулам одноименные положительные заряды, мочевина – водородные и гидрофобные, салицилат натрия и ДДС-Na – гидрофобные и ионные, а водные растворы спиртов – водородные и гидрофобные взаимодействия. Органические растворители разрывают белок-липидные связи.

Методы фракционирования и очистки от небелковых соединений основаны на различиях в растворимости, заряде, размерах молекул, сродстве к специфическим химическим группам.

Осаждение. Осаждение белков из раствора под действием солей щелочных и щелочноземельных металлов называют высаливанием. Процесс основан на понижении растворимости белка, которая зависит от их способности к гидратации. У глобулярных белков высокий уровень гидратации обеспечивается расположением на их поверхности гидрофильных групп. Осадители разрушают гидратную оболочку и вызывают осаждение белка. При повышенной концентрации соли или органических растворителей (спирт, ацетон) в растворе происходит сближение ионных атмосфер, образуемых противоионами белка, что способствует сближению их до расстояния, на котором межмолекулярные силы ван-дер-ваальсова притяжения перевешивают кулоновские силы отталкивания. Это приводит к слипанию белковых частиц и выпадению их в осадок.

Для высаливания часто применяется сульфат аммония, с которым белки, как правило, сохраняют растворимость и ферментативную активность, однако главную роль при этом играет не природа солей, а валентность ионов, действие которых оценивается по ионной силе (m):

m = ½ S С´V2,

где С – концентрация каждого вида иона; V – валентность ионов

Глобулины выпадают в осадок при 50 % насыщении, альбумины – при 100 % насыщения растворов солей, а при ступенчатом фракционировании от 20 до 100% насыщения могут выпадать белки и других классов (проламины, глютелины).

Изоэлектрическое осаждение. Заряд белков обусловлен в первую очередь остатками аспарагиновой, глутаминовой кислот (отрицательный заряд) и остатками лизина и аргинина (положительный заряд). По мере повышения рН заряд белков изменяется от положительных к отрицательным значениям и в изоэлектрической точке оказывается равен нулю. В результате белок лишается своей ионной атмосферы, частицы слипаются и выпадают в осадок.

Центрифугирование. Для отделенияосадка белка от раствора используется центрифугирование. Частицы осажденного вещества под действием центробежной силы оседают на дне центрифужных стаканов, формируются в плотный осадок, с которого легко сливается оставшийся раствор (надосадочная жидкость, или супернатант). Скоростные центрифуги (ультрацентрифуги) создают центробежное ускорение порядка 105g (т.е. 105 ускорений свободного падения), что позволяет осаждать даже некоторые крупные надмолекулярные агрегаты - рибосомы и вирусы.

В методе ультрафильтрации белки в градиенте плотности распределяются на разных уровнях центрифужной пробирки в процессе седиментации (осаждение) в виде отдельных зон. Для создания градиента используют соли тяжелых металлов и растворы сахарозы. Метод широко применяется для определения молекулярных масс белков по константе седиментации (S), которая зависит от массы и формы белковых частиц:

v

v , w2´r

где v – скорость перемещения границы растворитель-белок, см/с; w – угловая скорость ротора, рад/с; r – расстояние от центра ротора до середины ячейки с раствором белка.

Величина S, равная 1´10-13 c, принята за единицу и названа сведбергом (S) в честь Т. Сведберга, который впервые разработал ультрацентрифугу.

При диализе используют полупроницаемые мембраны (целлофан из нитрата целлюлозы, коллодийная пленка), через которые белки не

 
 

диффундируют и остаются внутри диализного мешочка. Более мелкие молекулы проходят через поры диализной мембраны и выходят в диализат в сосуд с водой. Непрерывный ток воды через сосуд приводит к полному переходу в него всех проходящих через целлофан веществ, а белки остаются внутри диализного мешочка

В методе ультрафильтрации, который применяется в производстве сывороточных белков молока, соевых белковых изолятов, по обе стороны мембраны создается разность давлений за счет продавливания фильтруемого белкового раствора. В качестве мембран используются целлюлозные пленки и нецеллюлозные полиэлектролитные комплексы. Аналогично мембранам по принципу молекулярного сита действуют и полые волокна. Белковый раствор помещается с внешней стороны волокон и создается разность давления за счет повышения его в растворе или понижения внутри их.

Адсорбционная хроматография основана на различиях на различном сродстве (полярности) компонентов смесей к определенным веществам - сорбентам. В колонке вместе с буферным раствором упаковывают адсорбент (гель фосфата кальция, оксид алюминия, активированный уголь, силикагель, пористое стекло) или используют, например, готовые алюминиевые пластины (тонкослойная хроматография – ТСХ) с нанесенным уже адсорбентом, на которые наносят в небольшом объеме растворителя исследуемый образец. Компоненты смеси адсорбируются на адсорбенте, затем элюируются с помощью буферного раствора с увеличивающейся концентрацией или полярностью. Фракции белка собираются с помощью автоматического коллектора фракций или количественно исследуются на приборе денситометр (ТСХ).

В распределительной хроматографии, в отличие от адсорбционной, в качестве неподвижной фазы выступает водный слой, удерживаемый твердой фазой (силикагель, бумага). Разделяемые вещества многократно распределяются между водным слоем и движущейся фазой растворителя и с разной скоростью перемещаются по длине колонки или бумаге. Для анализа пептидов и аминокислот чаще используют хроматографию на бумаге. Адсорбентом служат нити целлюлозы, а растворителем – смесь органических растворителей (бутиловый спирт–уксусная кислота–вода). Хроматограмму проявляют, высушивают и анализируют местонахождение разделяемых компонентов.

Метод ионообменной хроматографии белков или аминокислот основан на разделении на основе различий в заряде молекул. Если белок в нейтральной среде (рН 7) имеет положительный заряд, то он связывается на колонке с ионообменником, содержащим фенольные, сульфо- и карбоксильные группы (катионообменник), если отрицательный, то – на колонке с ионообменником, представленным аминами или органическими основаниями (анионообменник). Чаще всего для фракционирования белков используют производные полистирола и целлюлозы:

       
 
СН2 – О – С2Н4N+H (C2H5)2
 
CH2 – O – CH2 – COO

Диэтиламиноэтилцеллюлоза Карбоксиметилцеллюлоза

(ДЭАЭ – целлюлоза) (КМЦ)

Положительно заряженный белок снимается с колонки с помощью раствора хлористого натрия или изменением рН элюирующего буфера. При этом ионы натрия конкурируют с положительно заряженными группами белков. Белки с меньшим положительным зарядом вымываются с колонки первыми, с большим зарядом – последними.

Гель-фильтрация или метод молекулярных сит заключается в пропускании белков через колонку с гелем сефадекса или другими типами (агарозные, полистирольные). Применяются также пористые стеклянные шарики и пористый кварц (порасил). Наибольшее распространение получили декстрановые гели (сефадекс), являющиеся продуктом поперечного сшивания полисахаридных цепочек декстрана. Зерна сефадексов разных номеров содержат поры разных размеров, в которые могут проникать белки с определенной молекулярной массой. Низкомолекулярные белки распределяются в растворенном виде как внутри частиц полимера, так и между ними, а высокомолекулярные – только между частицами, поэтому вторые быстрее проходят через колонку и первыми вытекают из нее.

Очистка белков от низкомолекулярных примесей методом диализа.

Стр 1 из 5Следующая ⇒

Фотоэлектроколориметр

Для измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов по отношению к растворителю или стандартному раствору предназначен фотоэлектрический колориметр (ФЭК).

В основу работы этого прибора положен принцип уравнения интенсивности двух световых пучков, проходящих через оптические среды, при помощи переменной щелевой диафрагмы.

Световые лучи от лампы, отразившись от зеркал, проходят через светофильтры, кюветы и попадают на фотоэлементы, которые подключены к гальванометру. Так что при равенстве интенсивности падающих на фотоэлементы световых пучков стрелка гальванометра стоит на нуле.

При вращении барабана диафрагма, связанная с ним, меняет свою ширину и тем самым величину светового потока, падающего на фотоэлемент.

Фотометрически нейтральный клин служит для ослабления светового потока, падающего на фотоэлемент.

Способ измерения.

1.В пучок света помещают кюветы с контрольным раствором.

2.Вращением ручки круговых фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль.

3.Затем в пучок света вводится кювета с исследуемым раствором, при этом стрелка гальванометра отклоняется от нулевого положения. Снимается показание.

4.Прибор после окончания работы выключить. Осторожно промыть кюветы.
2. Пользоваться лабораторной центрифугой, термостатом, песчаной и водяной баней. Центрифу́га — устройство, (машина или прибор), служащее для разделения сыпучих тел или жидкостей различного удельного веса и отделения жидкостей от твёрдых тел путем использования центробежной силы. При вращении в центрифуге частицы с наибольшим удельным весом располагаются на периферии, а частицы с меньшим удельным весом — ближе к оси вращения.

Термоста́т — прибор для поддержания постоянной температуры. Поддержание температуры обеспечивается либо за счёт использования терморегуляторов, либо осуществлением фазового перехода (например, таяние льда)

Песчаные бани используют при необходимости в ещё более высоких температурных показателях. Они, по сути, являются лотками с двумя термоэлектрическими нагревателями, куда засыпают кварцевый песок. Обрабатываемые образцы помещаются в рабочую зону, образуемую 10-15 мм равномерно прогретого верхнего слоя. Эксплуатационные преимущества таких приборов очевидны: экономичное энергопотребление, простота в обслуживании и высокая равномерность прогрева теплоносителя.

лабораторные водяные баниобеспечивают более равномерное нагревание. Принцип их действия прост: сосуд с исследуемым материалом погружается в жидкость или, в случае с паровыми моделями, охватывается её парами. Поскольку в условиях нормального атмосферного давления температура кипения не превышает 100°C, её предельное значение устанавливается автоматически. Если силу нагрева требуется увеличить, они могут наполняться маслом или парафином (для t° до 250°С).
3. Провести кислотный гидролиз белка.

Гидролиз казеина и открытие в гидролизате фосфорной кислоты.

Ход работы. 100 мг порошка казеина растворяют в пробирке в 3 мл 10% раствора едкого натра или кали. Пробирку закрывают пробкой со стеклянной трубкой в качестве холодильника, закрепляют ее на асбестовой сетке металлической лапкой и нагревают. Через час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, жидкости дают остыть и нейтрализуют ее концентрированной азотной кислотой (12-15 капель) до слабокислой реакции на лакмус. При нейтрализации выпадает осадок высокомолекулярных продуктов неполного гидролиза белков (пептоны). После отстаивания жидкость фильтруют, с фильтром проделывают молибденовую пробу на фосфорную кислоту (к 20 каплям молибденового реактива добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на голом огне). Выпадает небольшой кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония (лимонно-желтого цвета).

12(NH4)2·Mo O4 + H3PO4 + 21HNO3 → (NH4)3PO4·12Mo O3 + 21 NH4NO3 + 12 H2O

желтый кристаллический осадок


4. Провести очистку белка от низкомолекулярных примесей методом диализа и гельфильтрации на молселекте.

Очистка белков от низкомолекулярных примесей методом диализа.

Принцип методаоснован на неспособности молекул белка (коллоидных частиц) проникать через полупроницаемую мембрану (пергамент, целлофан, колодий и др.), в то время как низкомолекулярные примеси легко проходят через поры этих мембран. Метод диализа широко используется для разделения и очистки белков и других биополимеров от примесей солей и низкомолекулярных органических соединений. Основанный на этом же принципе метод гемодиализа (вивидиффузия), применяется для лечения больных с почечной недостаточностью (аппарат «искусственная почка»).

Ход работы. В подготовленный колодиевый или целлофановый мешочек поместить 1 мл сыворотки крови (раствора яичного белка) и 3-4 мл 6% раствора хлористого натрия, аккуратно поместить их в стакан с дистиллированной водой. Через 30-60 минут с небольшими порциями диализируемого раствора белка (содержимое мешочка) и диализата (наружная жидкость) провести пробы на хлориды и белок, чтоб удостовериться в том, что соль диффундировала, а белок остался в мешочке.

Для обнаружения белка провести биуретовую реакцию.

Принцип метода. Реакция основана на способности пептидной группы белков и полипептидов образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета. Реакция позволяет обнаружить наличие пептидной связи в исследуемом веществе и, следовательно, является универсальной реакцией для обнаружения веществ белковой природы. Свое название реакция получила от производного мочевины биурета, который дает в данных условиях то же окрашивание, что и белок.

Техника проведения работы. В пробирку добавить 5 капель раствора белка, 10 капель раствора едкого натра и 1 каплю раствора сульфата меди. Отметить появление красно-фиолетового окрашивания.

Для обнаружения хлоридов к 0,5-1 мл раствора добавить 1-2 капли 1% раствора азотной кислоты и 1-2 капли 1% раствора азотнокислого серебра и отметить выпадение творожистого осадка.

 

Построение калибровочного графика.

Для этого применяют стандартный белок – альбумин сыворотки крови. Из 10% стандартного раствора альбумина в 4 пробирках готовят растворы белка как показано в таблице.

№ пробирки Стандартный 10% р-р альбумина, мл 0,9% раствор хлорида натрия, мл Концентрация белка, г/л
0,4 0,6
0,6 0,4
0,8 0,2
1,0

 

Из каждой пробирки берут по 0,1 мл раствора, добавляют к нему 5,0 мл биуретового реактива. Через 30 мин. измеряют экстинкцию на ФЭКе против контрольного раствора (0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и 5 мл биуретового реактива).

Полученные значения откладывают на оси ординат, а концентрацию белка (в г/л) на оси абсцисс.


6. Разделить белки сыворотки крови мегодом высаливания.

Количественное определение белка в моче по методу

Количественное определение белка в моче по методу

Специфичность ферментов.

Одно из более характерных свойств ферментов - их высокая специфичность. Ферменты специфичны как в отношении типа катализируемых реакций, так и в отношении субстратов, на которые они воздействуют. Большинство ферментов обладает абсолютной специфичностью, действуя только на какой-либо один субстрат. Высокая специфичность ферментов определяется соответствием пространственной конфигурации активного центра фермента и субстрата.

Амилаза слюны ускоряет гидролиз только полисахаридов (таких как крахмал, гликоген) до мальтозы, но не оказывает действие на дисахариды.

Гидролиз крахмала под влиянием ферментов слюны идет согласно схеме:

 

Гидролиз крахмала под действием амилазы проходит через стадию образования декстринов. Крахмал дает с йодом синее окрашивание, амилодекстрины («осколки», образующиеся после гидролиза некоторых внутренних гликозидных связей)- фиолетовое, эритро- и ахродекстрины (олигосахариды с меньшей молекулярной массой) – соответственно красно-бурое и желтое (цвет йода в воде). Конечные продукты гидролиза – мальтоза и глюкоза – имеют свободные альдегидные группы и дают реакцию Троммера, которая основана на способности углеводов при нагревании восстанавливать гидрат окиси меди (голубого цвета) в гидрат закиси (желтого цвета). При дальнейшем нагревании гидрата закиси переходит в красную закись меди.

О расщеплении крахмала можно судить на основании двух реакций:

1) реакции на крахмал с йодом и 2) реакции Троммера.

Сахароза не имеет свободной ?альдегидной или кетонной группы, поэтому не дает реакции Троммера. Реакция Троммера может быть положительной только в том случае, если сахароза расщепится на свои составные части – глюкозу и фруктозу.

Порядок выполнения работы

Споласкивают рот, в чистую пробирку собирают 2-3 мл слюны, которую разводят в 5 раз.

В две пронумерованные пробирки приливают по 5 капель разведенной слюны. В 1 пробирку добавляют 10 капель 1% раствора крахмала, во 2- 10 капель 1% раствора сахарозы. Обе пробирки помещают на 10 минут в термостат или водную баню при температуре 38оС, после чего содержимое пробирок делят на 2 части, с одной проделывают реакцию на крахмал, с другой реакцию Троммера.

Реакция Троммера

К 5 каплям исследуемой жидкости прибавляют 5 капель 10% раствора NaOH и 5 капель раствора CuSO4 и нагревают. В присутствии глюкозы и мальтозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди. Полученный результат занести в таблицу.

№ п/п Субстрат Фермент Температура Реакция на крахмал с йодом Реакция Троммера Выводы
1.            
2.            

Сделайте вывод о субстратной специфичности фермента.

 

Термолабильность ферментов.

Большинство ферментов термолабильны - при нагревании до 60-80о утрачивают каталитическую активность. Степень инактивирования зависит от длительности теплового воздействия. При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость ферментативного катализа снижается. В термолабильности ферментов можно убедиться на примере действия ферментов слюны: амилазы и мальтазы.

Порядок выполнения работы

В чистую пробирку отливают небольшое количество разведенной слюны (2-3мл) и кипятят ее в течение 5-8 минут, после чего охлаждают В 3 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель 1% раствора крахмала. В 1 пробирку добавляют 10 капель слюны, разведенной в 5 раз, во 2-ю 10 капель прокипяченной слюны, в 3-ю 10 капель воды (качестве контроля). Все пробирки помещают в термостат или водяную баню при температуре 38она 10 минут. После этого проделывают качественные реакции на крахмал и реакцию Троммера на продукты расщепления.

Реакция на крахмал. К 5 каплям исследуемого раствора приливают 1 каплю раствора йода в йодистом калии. В присутствии крахмала появляется синее окрашивание. Полученный результат занести в таблицу.

№ п/п Субстрат Фермент Температура Реакция на крахмал с йодом Реакция Троммера Выводы
1.            
2.            
3.            

Порядок выполнения работ

В 7 предварительно пронумерованных пробирок наливают 0,2 м раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,1 м раствор лимонной кислоты в соотношениях, указанных в таблице. Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 1% раствора крахмала, по 10 капель слюны, разведенной в 100 раз. Перемешивают содержимое пробирок и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38о на 5-10 минут (в зависимости от индивидуальных особенностей активности слюны).

Реакция с серной кислотой.

В пробу налить 1 каплю масляного раствора витамина Д, 4 капли хлороформа, перемешать и добавить 2 капли концентрированной серной кислоты. Встряхнуть и отметить появление ярко-желтого окрашивания, переходящего в буро-красное.

Качественная реакция на витамин Е с азотной кислотой.

В сухую пробирку налить 5 капель 1% раствора токоферола, прибавить 10 капель концентрированной азотной кислоты и встряхнуть. После отстаивания эмульсии отметить появление красного окрашивания в верхнем слое.

Проба Яффе на уробилин.

К 2 мл мочи прибавить небольшую порцию раствора хлористого цинка. При встряхивании появляется хлопьевидный осадок, который растворить в концентрированном растворе аммиака (около 1мл). В норме появляется слабо-зеленая флюоресценция, ярко выраженная при патологии.

Порядок выполнения работы

1. Устройство прибора для электрофореза. Прибор состоит из выпрямителя, подающего постоянный ток необходимого напряжения, и камеры для электрофореза. Сама камера состоит из 2-х ванн; в одной из них имеется неподвижная перегородка, куда помещается платиновый электрод (+ анод), а в другой находится электрод из нержавеющей стали (- катод). Между ваннами, заполненными соответствующим буфером, имеется соединительный мост, на который помещают полоски специальной фильтровальной бумаги.

2. Проведение электрофореза. Заполнить обе ванны камеры раствором вероналового буфера с pH 8,6. Буферного раствора в ваннах должно быть столько, чтобы он покрывал неподвижную перегородку, но был ниже подвижных перегородок.

Вставить в ванны электроды. Вырезать из фильтровальной бумаги полосы необходимого размера в зависимости от величины камеры (обычно шириной 4-6 см) и простым карандашом отметить место, на которое впоследствии будет наноситься сыворотка (старт). Смочить эти полоски в вероналовом буфере. Вставить в ванны-камеры соединительный мост. Поместить полоски бумаги на сухие пластинки щипцами, погрузив концы полосок в ванны с буфером, и на заранее отмеченные участки бумаги нанести сыворотку по 0,025-0,005 мл на расстоянии 5-6 см от края моста. Нанесение сыворотки производится со стороны катода.

Рисунок 1. Схема камеры для электрофореза белков на бумаге:

1-стабилизатор; 2-камера для электрофореза; 3-буферный раствор; 4-поддерживающий соединительный мост-электрод; 5-фильтровальная бумага для электрофореза.

После нанесения на бумажные полоски сыворотки камера герметично закрывается крышкой. На крышке камеры расположен прижим блокировки, служащий для включения камеры. Присоединенный выпрямитель подает к камере постоянный ток от 2 до 4 мА при постоянном напряжении 110-160В. Электрофорез проводят при градиенте потенциала от 3 до 8 В на 1 см полосы при комнатной температуре. Хорошее разделение происходит за 18-20 часов.

3. Выключение прибора и выявление белковых фракций. Выключают прибор. Снимают камеры и извлекают бумажные полоски из прибора. Затем каждую полоску помещают в сушильный шкаф на 20 минут при температуре 1050С. При этом происходит фиксация белковых фракций на бумаге. Окраску белков проводят раствором бромфенолового-синего в течение 30 минут, затем промывают электрофореграммы 2% раствором уксусной кислоты. Полученные электрофореграммы сушат на воздухе. Белковые фракции окрашиваются в сине-зеленый цвет.

4. Количественное определение белковых фракций. Окрашенные белковые пятна вырезают, краситель элюируют 0,01 н раствором щелочи. Интенсивность окраски каждой фракции определяют колориметрически на ФЭКе.

Количественное определение белковых фракций на электрофореграмме можно установить двумя способами: путем элюирования краски и фотоколориметрирования и денситометрическим методом.

Содержание белковых фракций сыворотки крови, полученное с помощью электрофореза на бумаге, в среднем составляет у взрослого человека:

альбумины 55,4-65,9 %

α1-глобулины 3,4-4,7 %

α2-глобулины 5,5-9,5 %

β-гдобулины 8,9-12,6 %

γ-глобулины 13-22,2 %

Денситометрический метод. В специальном аппарате (денситометре) через электрофореграмму пропускают пучок света, поглощение которого зависит от оптической плотности окрашенных белковых пятен. Свет, прошедший через электрофореграмму, улавливается фотоэлементом и превращается в электрический ток, колебания которого фиксируют на бумажном листе в виде кривой, каждый пик кривой соответствует определенной белковой фракции.

 

Рисунок 2. Электрофореграмма сыворотки человека.

 


2. Определение активности амилазы в слюне и моче по Вольгемуту.

По Вольгемуту.

Амилаза - фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов и мальтозы (химизм реакции см. занятие№6). Конечные продукты действия амилазы не дают цветной реакции с йодом. Наиболее богаты амилазой слюнные и поджелудочная железы.

Клинико-диагностическое значениеимеет определение активности амилазы в крови, куда она попадает из поджелудочной железы (40%) и слюнных желез (60%). Амилазная активность крови по Вольгемуту в норме составляет 25-125 Ед/л. При остром панкреатите в первые сутки заболевания активность амилазы крови возрастает в десятки раз, а затем постепенно возвращается к норме. Амилазная активность крови увеличивается также при паротите (воспалении слюнных желез). Амилаза имеет небольшую молекулярную массу – 45 000, поэтому легко проходит почечный фильтр и попадает в мочу. В связи с меньшей инвазивностью определение амилазной активности мочи (диастазный тест) широко используется в клинике для диагностики состояния поджелудочной железы (см. УИРС).

Принцип метода. Метод основан на том, что слюну разводят в определенной последовательности, после чего приливают одно и тоже количество раствора крахмала и находят наименьшее содержание фермента, которое полностью расщепляет все количество добавленного крахмала. Затем производят перерасчет активности фермента на 1 мл слюны.

Амилазная активность слюны или амилокластичекая сила слюны выражается количеством 0,1% раствора крахмала в мл, которое может расщепляться 1 мл слюны при температуре 380 в течении 30 мин.

В норме амилазная активность слюны составляет 160-320 ед.

Ход работы. В 10 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл воды. Затем в первую пробирку добавляют 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Содержимое первой пробирки перемешивают и 1 мл раствора (суммарное разведение в 20 раз) переносят из 1-й пробирки во вторую, перемешивают( рслюна разведена в 40 раз). Затем 1 мл разведенной слюны из второй переносят в третью и.т.д. - из предыдущей пробирки в следующую. Из 10 пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, получается ряд разведенной слюны, в котором в каждой последующей пробирки содержание фермента вдвое меньше, чем в предыдущей.

Во все пробирки добавляют по 1 мл воды и по 2 мл 0,1% раствора крахмала, перемешивают и помещают пробирки в термостат на 30 мин при температуре 380.

Через 30 минут пробирки вынимают, охлаждают, добавляют по 1-2 капле 1% раствора йода и перемешивают. Жидкость в пробирках в зависимости от степени расщепления крахмала может окрашиваться в желтый, розовый, красный и фиолетовый цвет. Раствор желтого цвета свидетельствует о полном расщеплении крахмала, фиолетовый – о том, что крахмал в растворе еще сохранился.

Работу необходимо оформить в виде таблицы.

    Разведение слюны   № пробирки
Кол-во 0,1% крахмала                      
Окрашивание йодом                      
Амилокластическая активность слюны                    
                       

Расчет. Берется количество слюны в последней пробирке с желтой окраской. Если это четвертая пробирка, то разведение слюны в ней – 160 раз. Составляется пропорция: 1). 160 мл слюны расщепляет 2 мл 0,1% р-ра крахмала; 2) 1 мл слюны расщепляет Х мл 0,1% р-ра крахмала, т.е. амилокластическая активность слюны составляет 320 ед.


3. Определение содержания пировиноградной кислоты в крови.

Техника выполнения работы.

Определение АсАТ.

Одновременно готовят опытную и контрольную пробы.

Опытная проба. В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора, добавляют 0,1 мл сыворотки, помещают в термостат при температуре 37° С на 1 час. Затем добавляют 0,5 мл раствора динитрофенилгидразина и выдерживают при комнатной температуре 20 мин для развития реакции. Затем приливают 5 мл 0,4 н NaOH, тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 мин для развития окраски. Оптическую плотность измеряют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете на 10 мм против контроля.

Контрольная проба. Содержит все ингредиенты опытной пробы за исключением сыворотки крови. Вместо нее берут 0,1 мл дистиллированной воды и инкубируют в тех же условиях, что и опытную.

Определение АлАТ.

Одновременно готовят опытную и контрольную пробы.

В опытную пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора для определения АлАТ, затем добавляют 0,1 мл испытуемой сыворотки и помещают в термостат при температуре 37° С на 30 мин. Дальнейший ход анализа такой же, как при определении АсАТ.

В контрольную пробирку вместо сыворотки крови берут 0,1 мл дистиллированной воды.

Расчет активности ферментов производят по калибровочному графику, отражающему зависимость оптической плотности от содержания ПВК.


9. Количественное определение остаточного азота крови.

Принцип определения:в результате сжигания безбелкового фильтрата крови азот низкомолекулярных азотистых соединений переходит в состав иона Nh5. Количество азота устанавливается по количеству кислоты, необходимой для связывания образовавшегося аммония.

В норме азот остаточный составляет 20— 40 мг%. Увеличение содержания азота остаточного в крови наступает при нарушении функции почек, печени, при усиленном распаде тканей (гангрена, туберкулез, злокачественные опухоли).
10. Количественное определение мочевины в сыворотке крови и моче. Количественное определение мочевины в моче по Рашковану.

Принцип метода.Основан на том, что мочевина с гипохлоритом натрия и фенолом образует продукт зеленого окрашивания.

Ход работы. В пробирку поместить 0,1 мл разведенной в 100 раз исследуемой мочи, добавить 7 мл этилового спирта и прилить 2 мл дистиллированной воды. К полученной смеси прибавить 1 мл 0,035 н раствора НСl, тщательно перемешать, добавить 1 мл 1,2 % NaOCl, вновь тщательно перемешать и сразу же добавить 1 мл 5 % раствора фенола. Содержимое пробирки хорошо перемешать и поместить на 25 мин в термостат при температуре 55-60° С.

Окрашенный в зеленый цвет раствор охладить и колориметрировать на ФЭКе с красным светофильтром в кюветах толщиной 5 мм против воды.

Концентрацию мочевины рассчитать с помощью калибровочного графика с учетом разведения мочи и суточного диуреза (1500-2000 мл).

Принцип в крови

Мочевина под действием уреазы разлагается на углекислый газ и аммиак, который в щелочной среде с гипохлоритом натрия и фенолом образует индофенол синего цвета (метод Бертло). Светопоглощение образовавшегося продукта пропорционально содержанию мочевины в образце.


11. Количественное определение креатинина в сыворотке крови и моче.

Техника выполнения работы.

В центрифужные пробирки вносят 1 мл сыворотки крови, добавляют 8 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 0,35М серной кислоты, перемешивают. Затем добавляют 0,5 мл 10% раствора вольфрамата натрия, опять переемешивают и через 10 мин. Центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин. После осаждения белков сыворотки крови центрифугированием ставят опытную, стандартную и контрольную пробы.

Опытная проба: 3 мл надосадочной жидкости переносят в чистую прбирку.

Стандартная проба: 3 мл 0,03М стандартного раствора мочевой кислоты (1 мл содержит 0,006 ммоль мочевой кислоты) налить в чистую пробирку.

Контрольная проба: В чистую пробирку прилить 3 мл дистиллированной воды.

Во все три пробирки добавляют 1,5 мл 10,3% раствора карбоната натрия, 1 мл фосфорновольфрамового реактива, тщательно перемешивают и через 30 мин опытную и стандартную пробы фотометрируют при длине волны 590-700 нм (красный светофильтр) в кювете длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы.

Расчет:концентрацию мочевой кислоты рассчитывают по формуле:

С= Еопыт.станд.×Естанд.×10, где

С – концентрация мочевой кислоты, ммоль/л;

Еопыт. – экстинкция опытной пробы;

Естанд.- экстинкция стандартной пробы;

Сстанд. – концентрация стандартного раствора мочевой кислоты,

0,03 ммоль/л;

10 – коэффициент пересчета на объём сыворотки крови.


13. Общий анализ мочи: физико-химические свойства, химический состав мочи, определение патологических компонентов мочи.

Проба Яффе на уробилин.

К 2 мл мочи прибавить небольшую порцию раствора хлористого цинка. При встряхивании появляется хлопьевидный осадок, который растворить в концентрированном растворе аммиака (около 1мл). В норме появляется слабо-зеленая флюоресценция, ярко выраженная при патологии.

Фотоэлектроколориметр

Для измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов по отношению к растворителю или стандартному раствору предназначен фотоэлектрический колориметр (ФЭК).

В основу работы этого прибора положен принцип уравнения интенсивности двух световых пучков, проходящих через оптические среды, при помощи переменной щелевой диафрагмы.

Световые лучи от лампы, отразившись от зеркал, проходят через светофильтры, кюветы и попадают на фотоэлементы, которые подключены к гальванометру. Так что при равенстве интенсивности падающих на фотоэлементы световых пучков стрелка гальванометра стоит на нуле.

При вращении барабана диафрагма, связанная с ним, меняет свою ширину и тем самым величину светового потока, падающего на фотоэлемент.

Фотометрически нейтральный клин служит для ослабления светового потока, падающего на фотоэлемент.

Способ измерения.

1.В пучок света помещают кюветы с контрольным раствором.

2.Вращением ручки круговых фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль.

3.Затем в пучок света вводится кювета с исследуемым раствором, при этом стрелка гальванометра отклоняется от нулевого положения. Снимается показание.

4.Прибор после окончания работы выключить. Осторожно промыть кюветы.
2. Пользоваться лабораторной центрифугой, термостатом, песчаной и водяной баней. Центрифу́га — устройство, (машина или прибор), служащее для разделения сыпучих тел или жидкостей различного удельного веса и отделения жидкостей от твёрдых тел путем использования центробежной силы. При вращении в центрифуге частицы с наибольшим удельным весом располагаются на периферии, а частицы с меньшим удельным весом — ближе к оси вращения.

Термоста́т — прибор для поддержания постоянной температуры. Поддержание температуры обеспечивается либо за счёт использования терморегуляторов, либо осуществлением фазового перехода (например, таяние льда)

Песчаные бани используют при необходимости в ещё более высоких температурных показателях. Они, по сути, являются лотками с двумя термоэлектрическими нагревателями, куда засыпают кварцевый песок. Обрабатываемые образцы помещаются в рабочую зону, образуемую 10-15 мм равномерно прогретого верхнего слоя. Эксплуатационные преимущества таких приборов очевидны: экономичное энергопотребление, простота в обслуживании и высокая равномерность прогрева теплоносителя.

лабораторные водяные баниобеспечивают более равномерное нагревание. Принцип их действия прост: сосуд с исследуемым материалом погружается в жидкость или, в случае с паровыми моделями, охватывается её парами. Поскольку в условиях нормального атмосферного давления температура кипения не превышает 100°C, её предельное значение устанавливается автоматически. Если силу нагрева требуется увеличить, они могут наполняться маслом или парафином (для t° до 250°С).
3. Провести кислотный гидролиз белка.

Гидролиз казеина и открытие в гидролизате фосфорной кислоты.

Ход работы. 100 мг порошка казеина растворяют в пробирке в 3 мл 10% раствора едкого натра или кали. Пробирку закрывают пробкой со стеклянной трубкой в качестве холодильника, закрепляют ее на асбестовой сетке металлической лапкой и нагревают. Через час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, жидкости дают остыть и нейтрализуют ее концентрированной азотной кислотой (12-15 капель) до слабокислой реакции на лакмус. При нейтрализации выпадает осадок высокомолекулярных продуктов неполного гидролиза белков (пептоны). После отстаивания жидкость фильтруют, с фильтром проделывают молибденовую пробу на фосфорную кислоту (к 20 каплям молибденового реактива добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на голом огне). Выпадает небольшой кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония (лимонно-желтого цвета).

12(NH4)2·Mo O4 + H3PO4 + 21HNO3 → (NH4)3PO4·12Mo O3 + 21 NH4NO3 + 12 H2O

желтый кристаллический осадок


4. Провести очистку белка от низкомолекулярных примесей методом диализа и гельфильтрации на молселекте.

Очистка белков от низкомолекулярных примесей методом диализа.

Принцип методаоснован на неспособности молекул белка (коллоидных частиц) проникать через полупроницаемую мембрану (пергамент, целлофан, колодий и др.), в то время как низкомолекулярные примеси легко проходят через поры этих мембран. Метод диализа широко используется для разделения и очистки белков и других биополимеров от примесей солей и низкомолекулярных органических соединений. Основанный на этом же принципе метод гемодиализа (вивидиффузия), применяется для лечения больных с почечной недостаточностью (аппарат «искусственная почка»).

Ход работы. В подготовленный колодиевый или целлофановый мешочек поместить 1 мл сыворотки крови (раствора яичного белка) и 3-4 мл 6% раствора хлористого натрия, аккуратно поместить их в стакан с дистиллированной водой. Через 30-60 минут с небольшими порциями диализируемого раствора белка (содержимое мешочка) и диализата (наружная жидкость) провести пробы на хлориды и белок, чтоб удостовериться в том, что соль диффундировала, а белок остался в мешочке.

Для обнаружения белка провести биуретовую реакцию.

Принцип метода. Реакция основана на способности пептидной группы белков и полипептидов образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета. Реакция позволяет обнаружить наличие пептидной связи в исследуемом веществе и, следовательно, является универсальной реакцией для обнаружения веществ белковой природы. Свое название реакция получила от производного мочевины биурета, который дает в данных условиях то же окрашивание, что и белок.

Техника проведения работы. В пробирку добавить 5 капель раствора белка, 10 капель раствора едкого натра и 1 каплю раствора сульфата меди. Отметить появление красно-фиолетового окрашивания.

Для обнаружения хлоридов к 0,5-1 мл раствора добавить 1-2 капли 1% раствора азотной кислоты и 1-2 капли 1% раствора азотнокислого серебра и отметить выпадение творожистого осадка.

 



Читайте также:

 

Диализ в исследованиях белков: понимание основ

  • О КОМПАНИИ
  • СПИСОК ЦИТАТОВ
  • ПОИСК ЛИТЕРАТУРЫ
  • СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ
  • ВХОД
    • ВХОД
    • РЕГИСТР
  • ПРОТЕОМИКА
    • Моющие средства и аксессуары
      • Каликсареновые поверхностно-активные вещества
      • Растворы для моющих средств Proteomic
      • Неионные детергенты
      • Ионные моющие средства
      • Цвиттерионные моющие средства
      • Системы удаления моющих средств
      • 2D-Моющие средства
      • Фторированные поверхностно-активные вещества
      • Принадлежности
    • Сшивание белков и модификация белков
      • Белковые кросслинкеры
      • Восстанавливающие реагенты
      • Алкилирующие реагенты
      • Реагенты для расщепления белков
      • Реагенты йодирования
      • Аминокислотные модификаторы боковой цепи
      • денатуранты
      • Принадлежности
.

Структурная биохимия / белки / очистка / диализ - Викиучебники, открытые книги для открытого мира

Из Wikibooks, открытые книги для открытого мира

Перейти к навигации Перейти к поиску
Найдите Структурная биохимия / белки / очистка / диализ в одном из родственных проектов Wikibooks: Викиучебник не имеет страницы с таким точным названием.

Другие причины, по которым это сообщение может отображаться:

  • Если страница была создана здесь недавно, она может быть еще не видна из-за задержки обновления базы данных; подождите несколько минут и попробуйте функцию очистки.
  • Заголовки в Викиучебниках чувствительны к регистру , за исключением первого символа; Пожалуйста, проверьте альтернативные заглавные буквы и подумайте о добавлении перенаправления сюда к правильному заголовку.
  • Если страница была удалена, проверьте журнал удалений и просмотрите политику удаления.
.

Protein Dialysis, Desalting and Concentration Support — Устранение неисправностей | Thermo Fisher Scientific

Вода быстро и легко перемещается через диализную мембрану. При диализе высокой концентрации растворенного вещества против разбавленного буфера для диализа будет происходить чистое перемещение воды (и, возможно, солей) в диализный блок через мембрану. Глицерин и некоторые сахара особенно гигроскопичны, и так же быстро, как они диффундируют через мембрану для достижения равновесия, они также значительно влияют на осмос воды через мембрану и, таким образом, могут вызвать изменение объема образца.Будьте осторожны при диализе с большими различиями в концентрации глицерина или сахара между образцом и диализной мембраной. Предотвратите это движение воды и последующее изменение объема образца путем диализа «пошагово», минимизируя разницу в концентрации воды между образцом и буфером для диализа на каждой стадии процесса диализа (см. Дополнительную информацию в разделе «Диализ: обзор»).

Миниатюрные диализные установки Slide-A-Lyzer ™ (10–100 мкл) самого маленького размера помещаются в поплавок.Если верхняя часть образца находится ниже верха буфера, то гидростатическое давление буфера заставит буфер проникать в устройство, увеличивая объем и разбавляя образец. Убедитесь, что диализная мембрана находится в контакте с буфером, а верхняя часть образца находится на уровне или выше уровня буфера, чтобы предотвратить это. .

Питание диализных пациентов | Блог HealthEngine


Что такое диализ?

Диализ - это лечение, при котором из крови удаляются продукты жизнедеятельности, которые обычно фильтруются почками. Его применяют людям с почечной или почечной недостаточностью. Правильное питание еще более важно для этих людей, поскольку они должны следить за тем, чтобы ненужные продукты жизнедеятельности не попадали в их организм с пищей.


Почки

Основная функция почек - вывод азотсодержащих и других продуктов метаболизма из организма через мочевыводящую систему.По своей функции почки поддерживают водный, электролитный и кислотно-щелочной баланс. Другая ключевая функция почек - поддерживать кровяное давление, вырабатывать эритропоэтин и активировать витамин D. Эффективность почек снижается, когда происходит потеря функции нефронов. Нефрон - это функциональная единица почек, в которой продукты жизнедеятельности из крови выводятся из крови и образуются моча.

Скорость, с которой нефроны фильтруют отходы из крови, измеряется как скорость клубочковой фильтрации (СКФ).Показатель СКФ в диапазоне 90–120 мл / мин обычно свидетельствует о нормальной функции почек. СКФ 4-5 мл / мин требует диализа.


Виды диализа

Диализ - это процесс удаления продуктов жизнедеятельности из крови в случае почечной недостаточности. Существует две основных формы диализа - гемодиализ и перитонеальный диализ. При гемодиализе кровь очищается за пределами тела с помощью аппарата, а в процессе перитонеального диализа кровь фильтруется через перитонеальную мембрану, расположенную в брюшной полости.Общей чертой обоих типов диализа является удаление шлаков и лишней жидкости из организма.

Любой из этих типов диализа может называться поддерживающим диализом, если он проводится на постоянной основе в амбулаторных условиях (например, на дому у пациента или в любое время, кроме госпитализации). Поддерживающий диализ предоставляется тем людям с почечной недостаточностью, которые получили первичное лечение и их состояние стабилизировалось.


Питание при диализе

У людей, проходящих лечение диализом, снижается способность почек избавляться от продуктов жизнедеятельности и биологических жидкостей.Следовательно, чтобы помочь людям, получающим диализ, оставаться здоровыми, требуется сбалансированная здоровая диета. Мониторинг диеты и оценка состояния питания квалифицированным диетологом или врачом играют жизненно важную и центральную роль в уходе за диализными пациентами - необходимо ежедневно потреблять необходимое количество энергии, белка, жидкости, витаминов и минералов.


Управление питанием

Поскольку почки людей, находящихся на диализе, не могут справиться с избыточной жидкостью и другими метаболическими отходами, жизненно важно, чтобы содержание питательных веществ в пищевых продуктах, потребляемых этими людьми, было тщательно сбалансировано.Люди, использующие диализ, часто потребляют недостаточное количество макроэлементов (калорийность или килоджоули), жидкости (вода) и / или важных микронутриентов (витаминов, минералов и микроэлементов). Данные свидетельствуют о том, что накопление токсинов, которое может возникнуть при почечной недостаточности, также может подавлять аппетит. В результате люди, получающие диализ, часто сокращают количество потребляемой пищи.

Дисбаланс питания у лиц, получающих диализ
Белково-энергетическая недостаточность

Недоедание часто встречается у людей, получающих диализ, и около 40% страдают от белковой и энергетической недостаточности различной степени.Белковая энергетическая недостаточность - это форма недоедания, при которой человек не потребляет достаточное количество макроэлементов (калорий) в виде белков, таких как мясо и бобовые; они потребляют слишком много макроэлементов в виде углеводов. Белковая энергетическая недостаточность возникает у людей, которые едят меньше рекомендуемого количества белка, которое составляет 1,2 г / кг массы тела. Это может произойти даже в том случае, если общее потребление макроэлементов (энергии) человеком является адекватным, то есть он потребляет 35 ккал / кг веса тела, если он моложе 60 лет, или 30 ккал / кг веса тела, если он старше 60 лет.

Причины белково-энергетического недоедания у людей, получающих поддерживающий диализ, разнообразны, включая снижение количества диетического белка и общего потребления энергии. Потребление протеина может быть ограничено, поскольку более высокое потребление протеина требует более высоких доз диализа. Обратите внимание: меньшее потребление белка при достаточном потреблении энергии требует меньших доз диализа.

Люди, находящиеся на диализе, могут не знать о рекомендуемом потреблении калорий и белков, если они не получают консультации по питанию от медицинского работника.Для людей, находящихся на диализе, важно получить консультацию по питанию, чтобы они понимали важность различных продуктов и типов питательных веществ, которые они добавляют в рацион, а не просто следуют диете, которая ограничивает потребление определенных продуктов.

Недостаток микроэлементов

Помимо белково-энергетической недостаточности, диализные пациенты также уязвимы к дефициту питательных микроэлементов, поскольку диализ может вызвать потерю водорастворимых витаминов, таких как витамины B и C.

Избыток микронутриентов

Диализ вызывает более быстрое удаление водорастворимых витаминов из организма, что может привести к их дефициту. При почечной недостаточности неспособность организма должным образом фильтровать кровь от других микронутриентов (которые не удаляются эффективно при диализе) означает, что избыток микронутриентов также часто встречается у диализных пациентов. Лучший способ исправить это - ограничить потребление определенных питательных микроэлементов с пищей.

Витамин А

Витамин А - жирорастворимый витамин, который в отличие от водорастворимых витаминов (например,г. витамин C) не выводится из организма при диализе. Почки играют важную роль в удалении витамина А и его побочных продуктов (особенно ретинола) из организма. У людей с почечной недостаточностью концентрация витамина А в кровотоке обычно увеличивается. Однако витамин А в кровотоке с меньшей вероятностью будет поглощен тканями и клетками организма, где он используется для восстановления и поддержания.

Необходимы дальнейшие исследования, чтобы правильно понять роль витамина А в диализе и вопрос о том, должны ли люди, получающие диализное лечение, получать добавки витамина А.С одной стороны, есть опасения, что введение людям, находящимся на диализе, добавок витамина А может привести к чрезмерной концентрации в кровотоке и иметь токсические эффекты. С другой стороны, есть доказательства того, что низкий уровень витамина А при диализе связан с повышенным риском смерти от сердечных заболеваний.

фосфор

Продукты, богатые фосфором (например, молочные продукты, орехи, бобы, чечевица, напитки кола, пиво и напитки какао), повышают уровень фосфора в крови.К сожалению, диализ вряд ли удалит накопившийся уровень фосфора в крови, и это может привести к накоплению чрезмерного количества фосфора в крови, что, в свою очередь, приведет к высвобождению кальция из костей. Постоянное удаление кальция из костей может в конечном итоге сделать их слабыми. Также известно, что высокое накопление фосфора в крови приводит к образованию так называемых кристаллов кальция и фосфора в суставах, мышцах, крови и сердце. Кристаллы кальция и фосфора могут вызывать такие проблемы, как боль в костях, плохое кровообращение и даже повреждение сердца.

Калий

Людям, проходящим гемодиализ, возможно, придется ограничить потребление продуктов, богатых калием. Калий является важным минералом для диализных пациентов, поскольку нарушение функции почек может привести к повышению уровня калия в крови. К продуктам с высоким содержанием калия относятся бананы, дыни, апельсины, картофель, помидоры, молоко, птица и рыба.

Натрий

Людям, находящимся на диализе, следует избегать диеты с высоким содержанием натрия, поскольку она увеличивает потребление жидкости от жажды.При повышенном потреблении жидкости и нарушении функции почек человек, находящийся на диализе, может удерживать в организме слишком много жидкости. Чтобы сократить потребление соли, человеку, возможно, придется приправлять пищу травами и специями вместо обычной соли. Последствия повышенного содержания натрия могут привести к:

Избыток жидкости

Необходимо учитывать и избегать факторов, которые могут привести к увеличению потребления жидкости. Жидкости включают любую пищу или напитки, которые остаются жидкими при комнатной температуре, например подливы, супы, мороженое, чай, кофе, соки, воду, газированные напитки.


Пищевые добавки

Пациентам с почками, находящимся на диализе, возможно, придется дополнить свой рацион витаминами и минералами, чтобы улучшить свой пищевой статус. Некоторым людям на диализе могут быть рекомендованы диеты с ограничением калия или белка, но такие диеты могут привести к дефициту тиамина (витамина B1) и рибофлавина (витамина B2). Поэтому людей, находящихся на диализе, могут попросить принимать добавки витамина B для предотвращения дефицита. Для витамина B1 дополнительная доза 1.0-1,5 мг / день достаточно; для витамина B2 достаточно 1,0–2,0 мг / день добавки. Людям, находящимся на диализе, важно принимать витаминные добавки в соответствии с рекомендациями врача. Однако данные свидетельствуют о том, что многие этого не делают. Например, исследование, проведенное в Новой Зеландии, показало, что многие диализные пациенты не принимали свои добавки в соответствии с рекомендациями, по крайней мере, отчасти из-за низкого аппетита.

Некоторые добавки, особенно жирорастворимые микронутриенты (например, витамин А), могут быть вредными для людей, получающих диализ, поскольку они могут накапливаться в организме.Их следует избегать.


Мониторинг состояния питания при диализе

Для профилактики и лечения недостаточности питания важно, чтобы состояние питания людей, получающих диализ, оценивал медицинский работник (например, диетолог или / врач). Оценка питания позволяет выявить тех людей, которые еще не страдают от недоедания, но находятся в группе риска.
Оценка питания выполняется путем изучения показателей питания, в том числе:

  • Жировая и мышечная масса: Клиническая оценка подкожно-жировой массы (FM) и мышечной массы, а также история потери веса должны составлять важные части рутинной пищевой оценки белковой недостаточности у людей, находящихся на диализе.Снижение жировых отложений и мышечной массы указывает на недостаточное питание. Индекс массы тела (ИМТ) также является важным показателем для оценки недостаточности питания, особенно ожирения. Большинство диализных пациентов с недоеданием также имеют сопутствующие заболевания, в частности сердечно-сосудистые заболевания и воспаление, поэтому их оценка является неотъемлемой частью оценки питания диализных пациентов.
  • Креатинин сыворотки: Креатинин - это продукт жизнедеятельности, образующийся в результате нормального метаболизма в организме.Выводится из организма почками. Следовательно, уровень креатинина может повышаться с увеличением неспособности почек функционировать. Нормальный уровень креатинина в крови у мужчин обычно составляет менее 120 мкмоль / л и 90 мкмоль / л для женщин. Таким образом, низкий уровень креатинина может отражать нормальную функцию почек или режим питания.
  • Сывороточный альбумин: Низкий уровень может отражать недостаточное потребление белка или калорий.


Важные диетические советы для диализных пациентов

  • Ешьте свежие или просто замороженные овощи, часто без добавления соли.
  • Выбирайте консервированные фрукты, которые обычно содержат меньше калия, чем свежие.
  • Используйте немолочные сливки с низким содержанием фосфора вместо молока.
  • Прочтите этикетки на упаковках продуктов, чтобы руководствоваться ими при выборе продуктов, содержащих только разрешенные ингредиенты.
  • Помогите снизить содержание соли в своем рационе, используя травы и специи вместо обычной поваренной соли.

Дополнительная информация

Для получения дополнительной информации о питании, включая информацию о типах и составе продуктов питания, питании и людях, условиях, связанных с питанием, а также диетах и ​​рецептах, а также некоторых полезных видеороликах и инструментах, см. Питание.

Список литературы

  1. Savica VSD, Ciolino F, Mallamace A, Calvani M, Savica R, Bellinghieri G. Нутриционная терапия при хронической болезни почек. Nutr Clin Care 2005; 8 (2): 70-76.
  2. Мишель М. Романо. Почечные заболевания. В: Люсинда К. Лизен, изд. Краткий справочник по клинической диетологии. Мэриленд: Aspen Publishers, Inc., 1997.
  3. Накао Т., Нива Т., Кайсен Г.А. и др. Управление питанием диализных пациентов: баланс между потреблением питательных веществ, диализной дозой и статусом питания.Американский журнал болезней почек 2003; 41 (№ 3, Приложение 1): S133-S136.
  4. Дивайн WCJ. Текущее управление питанием пациентов с почечной недостаточностью. Top Clin Nutr 1992; 7 (4): 21-33.
  5. Acchiardo ML, Latour PA. Недоедание как основной фактор заболеваемости и смертности гемодиализных больных. Kidney Int. 1983; 24 (16): 199-203.
  6. Национальный фонд почек. Руководство по питанию и гемодиализу. Нью-Йорк: Национальный фонд почек 2006: 1-16.
  7. Гувер Х.Комплаентность у гемодиализных пациентов: обзор литературы. J Am Diet Assoc 1989; 89 (7): 957-959.
  8. Шери Суриаль. Препятствия на пути использования пищевых добавок у диализных пациентов в окружном управлении здравоохранения Окленда и окружном управлении здравоохранения округа Манукау Получено из: [URL Link] 2003.
  9. Stenvinkel P, Heimbürger O, Lindholm B, Kaysen GA, Bergström J. Есть ли два типа недостаточности питания при хронической почечной недостаточности? . Трансплантат Nephrol Dial 2000; 15: 953-960.
  10. Kidney Health Australia.Хроническое заболевание почек. Австралия: Здоровье почек Австралия: [URL-ссылка] 2006 г.
  11. Правительство Массачусетса. Лечение хронического поддерживающего диализа и принадлежности для домашнего диализа. 2012. [цитировано 12 января 2015 года]. Доступно по адресу: [URL-ссылка]
  12. Ахмед С. Химмельфарб Дж. Азбука микронутриентов у диализных пациентов. Am J Kidney Dis. 2010; 56 (3): 431-33. [Полный текст]
.

Диетический белок и хроническая болезнь почек - Белковые и фосфорные продукты

Без белка наши тела не смогли бы излечиться от травм, остановить кровотечение или бороться с инфекцией. Вот почему употребление белка так важно для поддержания здоровья. В среднем человеку требуется от 40 до 65 граммов белка каждый день.

Однако белок может быть непростой задачей для людей с хронической болезнью почек (ХБП). Хотя белок является необходимым питательным веществом, пациенты часто сталкиваются с дилеммой ограничения потребления белка.

Белок и пациент с ХБП

Когда белок попадает в организм, образуются белковые отходы. В здоровых почках есть миллионы нефронов, которые фильтруют эти отходы. Затем он выводится из организма с мочой.

Нездоровые почки теряют способность выводить белковые отходы, и они начинают накапливаться в крови. Потребление белка с пищей для пациентов с ХБП зависит от стадии заболевания почек, статуса питания и размера тела.Консультации с дипломированным диетологом рекомендуются для планирования и контроля диеты с низким или высоким содержанием белка.

Белок и стадии CKD

Пять стадий ХЗП определяются скоростью клубочковой фильтрации (СКФ), показывающей, насколько хорошо функционируют ваши почки.

На стадии 1 ХЗП СКФ составляет 90 или выше, что является нормальным явлением. Однако в моче обнаруживаются аномальные уровни белка.На 2 стадии СКФ составляет 60-89. На 3 этапе СКФ до 30-59. На стадии 4 СКФ резко снижается до 15-29.

Стадия 5, последняя стадия заболевания почек, известная как терминальная стадия почечной недостаточности или ТПН, возникает, когда СКФ падает ниже 15, а функции почек практически отсутствуют.

Хотя стадия 4 указывает на серьезное снижение функции почек, вы все равно можете жить без диализа. Поскольку от болезни почек нет лекарства, основное внимание уделяется поддержанию вашего питания и сокращению накопления белковых отходов.Избыток белка может вызвать тошноту, потерю аппетита, рвоту, слабость, изменение вкуса и зуд.

Если вы находитесь на этапах 1, 2 или 3, потребление белка может быть ограничено до 12–15 процентов от ежедневного потребления калорий. Это тот же уровень, который рекомендован рекомендованными диетическими дозами (DRI) для здорового питания нормальных взрослых. Если вы находитесь на 4 стадии ХБП, диетолог может посоветовать вам снизить потребление белка до 10 процентов от суточной нормы калорий.

Белок и ESRD

Пациентам, находящимся на стадии 5 и у которых почки работают менее чем на 10 процентов, необходим диализ, чтобы заменить отказавшие почки или пока не станет возможна трансплантация почки.

Диализ удаляет белковые отходы из крови, и диета с низким содержанием белка больше не требуется. К сожалению, некоторые аминокислоты удаляются во время диализа. Для восполнения потери белка необходимо более высокое потребление белка.

Диабет, ХБП и белок

Если у вас ХБП в результате диабета, ваш диетолог и врач помогут вам управлять диабетом. Хороший контроль уровня глюкозы и артериального давления может помочь замедлить прогрессирование заболевания почек у людей с диабетом.Ваш диетолог определит необходимый вам уровень ограничения белка.

Некоторые белки лучше других?

Продукты с высоким содержанием белка, такие как мясо, молоко и яйца, могут быть с высоким содержанием жира и холестерина. Если у вас высокий уровень холестерина или сердечно-сосудистые заболевания, ваш врач и диетолог могут порекомендовать есть больше полезных для сердца белков. Хороший выбор - рыба, куриная грудка, нежирные соевые продукты, а также нежирные молочные продукты.

Фосфор - это минерал, который накапливается в крови по мере прогрессирования почечной недостаточности. Вам могут посоветовать отказаться от продуктов с высоким содержанием белка и фосфора, если ваш уровень превышает нормальный. Молоко, йогурт, сыр, сушеные бобы и горох, орехи и семена, арахисовое масло и некоторые соевые продукты содержат большое количество белка и фосфора.

Как регулируется белок?

Чтобы убедиться, что вы получаете необходимое количество белка для вашего состояния, сначала поговорите со своим почечным диетологом, чтобы получить конкретные рекомендации относительно потребления белка.Это число будет зависеть от вашей стадии ХБП, результатов лабораторных исследований, размера тела и других состояний здоровья.

Если вам назначена диета с низким содержанием белка, порции белковой пищи будут меньше, чем обычно. Для человека среднего роста потребление мяса, птицы или рыбы ограничено от 4 до 6 унций в день.

Если я не могу есть белок, что мне есть?

Несмотря на то, что ваш рацион может быть ограничен продуктами с высоким содержанием белка, вы все равно будете есть различные продукты, такие как яйца, молоко, мясо, птицу, рыбу, фрукты, овощи и зерновые.Достаточное количество калорий важно для предотвращения разрушения мышц и потери веса. Вам могут посоветовать есть больше полезных жиров, таких как оливковое масло, или принимать добавки, которые помогут вам получить достаточно калорий.

В зависимости от вашего состояния вам также может потребоваться ограничить потребление натрия, калия или фосфора. Это определяется вашим кровяным давлением и вашими лабораторными показателями. Вас проконсультирует врач-диетолог.

.

Белков и диета для перитонеального диализа

Заявление об отказе от ответственности: Эта статья предназначена только для информационных целей и не предназначена для замены медицинского совета или диагноза от врача.

Как пациент на перитонеальном диализе (ПД) ваша диета отличается от других диализных диет. Одним из отличий вашей диеты от диеты на гемодиализе является то, что вам может потребоваться больше белка. Узнайте, почему вам может потребоваться больше белка, какой белок лучше всего есть, как обеспечить его достаточное количество и как контролировать потребление фосфора.

Сколько качественного протеина мне нужно есть?

Ваш диетолог поможет вам решить, сколько высококачественного протеина вы должны есть в течение дня. Как правило, вы можете съедать высококачественный белок при каждом приеме пищи. Вы также можете добавлять белок в свой рацион в течение дня, выбирая закуски, богатые высококачественным белком.

Чтобы не отставать от того, сколько белка вы потребляете, вы можете использовать весы для взвешивания пищи или оценить количество высококачественного белка, присутствующего в обычных размерах порций.Эта таблица может помочь вам оценить:

1 унция белка

2 унции белка

3 унции белка

  • 1 яйцо
  • Куриное крылышко
  • ¼ чашки нарезанного мяса или рыбы
  • ¼ чашка творога
  • ¼ чашка заменителя яиц
  • Фрикадельки размером с шарик для пинг-понга
  • Голень куриная или бедро
  • ½ стакана творога или тунца
  • Маленькая свиная отбивная
  • 10-12 средние креветки
  • Кусок мяса, птицы или рыбы размером:
    • Колода карт
    • Женская ладонь
    • Чековая книжка
  • Средняя свиная отбивная или куриная грудка
  • 18-20 больших креветок

Протеиновые добавки и порошки также являются хорошим способом добавить белок в свой рацион.Их можно добавлять в различные продукты, чтобы увеличить количество белка в пище, не увеличивая при этом количество съедаемой пищи.

Почему я должен есть так много белка только потому, что нахожусь на перитонеальном диализе?

Поскольку вы находитесь на перитонеальном диализе, вам необходимо потреблять больше белка, чем средний пациент на гемодиализе, потому что вы теряете небольшое количество белка каждый раз, когда сливаете диализат из брюшной полости.

Белок важен, потому что он укрепляет ткани вашего тела, заживляет раны, борется с инфекциями и предотвращает отеки, помогая жидкости оставаться в ваших кровеносных сосудах. Чтобы ваше тело не расщепляло собственные ткани, чтобы получить белок, вы должны обязательно включать в свой ежедневный рацион много продуктов с высоким содержанием белка.

В каких продуктах больше всего белка?

Важно, чтобы большая часть потребляемого вами белка была высококачественным белком, формой белка, которая легко усваивается вашим организмом.Высококачественный белок содержится в некоторых пищевых добавках и продуктах животного происхождения, например:

Важно отметить, что, хотя вы хотите быть уверены, что получаете достаточно белка, это должен быть правильный вид белка. Такие продукты, как соевые бобы, орехи, арахисовое масло, сушеные бобы и сушеный горох, содержат белок более низкого качества. Эти продукты также богаты фосфором - минералом, который вам, возможно, посоветуют ограничить в своем рационе.

Что я могу сделать, чтобы контролировать потребление фосфора?

Фосфор, минерал, содержащийся в пище, которую вы едите, в больших количествах присутствует в молочных продуктах, цельнозерновом хлебе, обработанных пищевых продуктах, напитках с колой и шоколаде.Избыток фосфора в вашем рационе может привести, помимо прочего, к проблемам с костями и сердцем, боли в костях, зуду и низкому содержанию кальция в крови.

Вот несколько способов снизить потребление фосфора:

  • Получите весь прописанный вам диализ

Укорочение или пропуск диализных процедур приводит к накоплению фосфора в крови. Поэтому обязательно получите полный объем диализа, который прописал вам врач.

  • Принимайте фосфатсвязывающие препараты при каждом приеме пищи и во время перекусов, если это предписано.

Фосфатсвязывающие средства, такие как PhosLo®, Renvela®, Fosrenol® или TUMS®, могут быть прописаны вашим врачом и должны приниматься в правильной дозе каждый раз, когда вы едите. Эти лекарства связываются с фосфором в пище, чтобы предотвратить его попадание в кровоток.

  • Контролируйте количество потребляемых продуктов с высоким содержанием фосфора

Продукты с высоким содержанием фосфора, которые следует ограничивать или избегать, включают сыр, сушеные бобы, сушеный горох, печень, шоколад, орехи, арахисовое масло и напитки кола.Кроме того, вам может потребоваться ограничить потребление молочных и цельнозерновых продуктов.

Сводка

Диета для перитонеального диализа отличается от других диализных диет, поскольку может потребовать больше белка. Поговорите со своим врачом и диетологом для получения дополнительной информации о ваших конкретных потребностях в белке.

.

Смотрите также